丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼微板法)
一、产品简介：
丙酮酸(Pyruvic acid，PA)又称2-氧代丙酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰辅酶A和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。丙酮酸是糖无氧代谢的产物，科研工作者常将丙酮酸和乳酸一起研究，并用二者的比值推算循环衰竭的程度。丙酮酸检测可采用乳酸脱氢酶催化法或二硝基苯肼比色法。
雅吉生物丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼微板法)检测原理是在酸性条件下,丙酮酸与二硝基苯肼反应，生成丙酮酸-二硝基苯腙复合物，后者经氧化呈棕红色，通过酶标仪测定520nm处吸光度，据此通过与标准曲线对比可以计算出PA水平。该试剂盒可用于检测植物、细胞或组织、血清等样品中内源性的丙酮酸含量,尤其适用植物样品丙酮酸含量的检测。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
二、产品组成：
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名称 |
100T |
Storage |
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试剂(A):丙酮酸标准(6mg/ml) |
1ml |
4℃避光 |
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试剂(B):组织匀浆液(3×) |
100ml |
RT避光 |
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试剂(C):苯肼显色液 |
3ml |
4℃避光 |
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试剂(D): PA Assay Buffer (1.5×) |
10ml |
RT |
三、自备材料：
1、离心管或小试管
2、蒸馏水
3、酶标仪、96孔板
四、操作步骤(仅供参考)：
1、配制组织匀浆液(1×)∶取10ml组织匀浆液(3×)加入20ml蒸馏水即成。
2、配制PA Assay Buffer (1x)∶取10ml PA Assay Buffer (1.5×)加入5ml蒸馏水即成。
3、准备样品︰
①血清、尿液及其他体液样品:血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20°C冻存。
②组织样品︰称取1g组织样品置于匀浆器中，再加入1ml组织匀浆液(1x)仔细研磨，振摇提取静置30min ,取上清液4000rpm离心10min ,取上清液,用组织匀浆液(1×)定容至2ml , -20℃冻存，用于PA的检测。
③植物材料︰称取1g植物材料置于匀浆器中，再加入1ml组织匀浆液(1×)仔细研磨，振摇提取,静置30min ,取上清液4000rpm离心10min ,取上清液,用组织匀浆液(1×)定容至2ml , -20℃冻存，用于PA的检测。
④高浓度样品:如果样品中含有较高浓度的PA，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清可稀释5～10倍后检测。
4、配制标准品工作液︰如果检测血清、尿液等样品，按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1：99的比例配制，使浓度达到60μg/ml，如果检测组织样品按丙酮酸标准(6mg/ml) :组织匀浆液(1×)=1:99的比例配制，使浓度达到60μg/ml。
a、检测血清、尿液等样品时，用96孔板按下表操作:
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加入物（μl） |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
丙酮酸标准(60μg/ml,蒸馏水配制) |
2.5 |
5 |
7.5 |
15 |
30 |
45 |
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蒸馏水 |
72.5 |
70 |
67.5 |
60 |
45 |
30 |
|
丙酮酸浓度(μg/ml) |
2 |
4 |
6 |
12 |
24 |
36 |
b、检测组织样品时，用96孔板按下表操作:
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加入物（μl） |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
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丙酮酸标准(60μg/ml,蒸馏水配制) |
2.5 |
5 |
7.5 |
15 |
30 |
45 |
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组织匀浆液(1×) |
72.5 |
70 |
67.5 |
60 |
45 |
30 |
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丙酮酸浓度(μg/ml) |
2 |
4 |
6 |
12 |
24 |
36 |
5、PA加样︰按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的PA浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
a、检测血清、尿液等样品时，用96孔板按下表操作:
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加入物（μl） |
空白孔(血清等) |
标准孔 |
测定孔 |
|
蒸馏水 |
75 |
- |
- |
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蒸馏水稀释后的各丙酮酸标准 |
- |
75 |
- |
|
代测样本 |
- |
- |
75 |
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苯肼显色液 |
25 |
25 |
25 |
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充分混匀 |
|||
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PA Assay Buffer |
125 |
125 |
125 |
