蛋白marker的分类
一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量标准
未染色的蛋白分子量标准是-简单,也是准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,
是精-确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数都选用预混和的Marker,方便不同大小的蛋白比较。预混的Marker通常有几条带加倍浓度
作为指示,因为混合的条带越多,越不好记,谁知道哪条是那条!数到眼都花了。所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。
不过要记得,小带通常都不那么容易看清楚的。在选择上来说,当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的-好,越近越好
。如果你的蛋白不幸在两条跨度较大Marker条带之间,选别的Marker吧。预混的Marker使用上不如预染Marker(pre-stained)好用,
因为电泳过程中看不到,要和目标蛋白一起等到后染色才“开蛊",无法对实验起预示参照作用。属于“后知后觉"型的,
当然还是比“不知不觉"不做对照的要好。
① 宽分子量蛋白标准
如果从实验室总体考虑的,就选范围尽量宽,条带分布比较均匀的,这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断,避免正好落在一段空白区的
危险。不过条带越多,每次上样量也就越费。拿到Marker后,如果买的是大包装,就应该考虑分装。多次反复冻融对于蛋白的危险,
不用多说吧。另外要记得,宽谱的Marker不一定每条都能看到的,特别是Mini Cell。如果侧重大蛋白,那小的可能就已经跑掉了,
不是质量不好哦。
② 高分子量蛋白标准
通常在检测大分子量蛋白经常使用到高分子量蛋白标准,
③ 低分子量蛋白标准
在一般的蛋白电泳当中,更常用的是低蛋白标准分子量,除了有指示蛋白大小的作用以外,有时还可以用作粗略的定量。实验室用在一般
蛋白电泳的低分子量蛋白标准中。
在低分子量蛋白标准这里还包括可特别小的蛋白标准,比如30kD以下蛋白或者多肽的分离辨别。其中GE的从2kD到16kD之间有6条带的蛋白
标准挺不错,另外提醒一句,特别小的蛋白Marker条带如果要显色好,上样一定要上足够的量哦。
二.预染蛋白分子量标准
预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物,通过与染料共价耦联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便
了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后,以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如,已知垂直电泳-
佳分辨区域大约在胶的2/3处,如果使用预染Marker就可以预测目标蛋白进入-佳分辨区时停止电泳以得到-佳分辨效果;
如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳;另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否,
还可以在膜上标记蛋白分子量,所以吸引了许多实验室人员购买预染蛋白标准。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价耦联,
所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差,所以不太适合精-确定位蛋白——不过多数情况下
Marker的条带未必能和我们的目标蛋白一样,我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小,后都需要Western来定性,
所以如果不是要区分大小相近的条带,预染Marker还是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。
预染蛋白标准可以分为两种:单色预染和多色预染,其实区别就在于帮助在实验过程中辨认某个条带的大小——Marker条带越多参考价值越
大,可就越难辨认区分,如果用不同的颜色来区别就比较好辨认啦。如果沉闷的电泳实验中跑出五颜六色的彩虹Marker,
此时心情想必会愉快一些!单色的Marker通常是利用其中某些条带加倍浓度来提示其大小的。还有一点特别要注意,由于转膜是一个将胶里
的Marker浓缩在洁白的膜上,所以需要的上样量相对少一些,如果想要在电泳过程中看到美丽的“彩虹",或者单色的Marker往往需要比
说明书里多加一些Marker的。