人上皮特异性抗原(ESA)Elisa试剂盒，检测原理如下，如需详细说明书请联系我们索取
试剂盒采用双抗体夹心法原理：将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及校准品中待测物，加入辣根过氧化物酶标记的酶标二抗，结合形成“抗体-抗原-抗体-HRP”免疫复合物，加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中待测物的浓度。
包含的实验材料实验材料
名 称 组成成分
酶标板 预包被捕获抗体的酶标板
校准品（10×） 待测物
酶标抗体（100×） 100倍浓缩HRP酶标记的检测抗体
通用稀释液（20×） 样品/校准品/酶标抗体通用稀释液
浓缩洗液（20×） 20倍浓缩洗液
显色剂 TMB、过氧化氢
终止液 稀硫酸
如需单独采购通用型组分，请提供对应的组分名称。
试剂的准备及储存
1×洗液的配制：浓缩洗液（20×）如有晶体析出，需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。
1×通用稀释液的配制：用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL的20×浓缩通用稀释液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。
1×酶标抗体工作液的配制：100×酶标抗体用“1×通用稀释液”按1:100倍稀释，例如：10uL的（100×）酶标抗体加入990uL的“1×通用稀释液”，混合均匀。配制好的1×酶标抗体工作液可以在2~8℃保存8h。
· 工作校准品的配制：校准品开封前应离心30秒，确保所有校准品集中于底部；
准备7个离心管，将10×校准品按需吸取一定量用“1×通用稀释液”稀释10倍配制成校准品S1。例：50uL的10×校准品+450uL的“1×通用稀释液”，制备得到500μL的S1浓度校准品。在随后的6个离心管中分别加入250μL的“1×通用稀释液”，在这6个试管中（S2~S7）将S1校准品依次倍比稀释6个梯度至S7，共配制7个浓度的校准品，依次为：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如随货说明书中图所示，“1×通用稀释液”作为零浓度校准品S0，共8支校准品。
实验步骤
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右，也可置于37℃温箱快速回温至室温。
注意：酶标板未恢复室温前，请勿开封。
编号 检测试验需设置校准品孔、样品孔，合理规划各样本的排布。
稀释加样 校准品孔：每孔加入校准品100uL，（S0-S7，共8个浓度）。
样品孔：每孔加入样品稀释液80uL，再加入样品20uL。*
测细胞：每孔加入细胞上清100uL。
温育 盖上封板膜，在37℃下孵育60分钟
洗板 洗板3次，最后一次洗板后倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍去残液。
加酶 每孔加入100μL酶标抗体工作液。
温育 盖上封板膜，在37℃下孵育60分钟。
洗板 洗板5次，最后一次洗板后倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍去残液。
显色 每孔加入显色剂100uL，37℃避光显色15分钟。
终止 每孔加终止液 50uL。
测定 使用酶标仪在450nm检测波长及620~690nm参比波长条件下测定吸光度值，如果没有参比波长则仅选择450nm波长进行检测。如果最高浓度校准品OD值过高，应立即在405/630nm双波长条件下检测。
* 样品稀释液50uL，加样品50uL样品稀释倍数为2倍。
* 样品稀释液80uL，加样品20uL，则稀释倍数为5倍。
* 如样本珍贵量少，可适当加大稀释倍数，应当进行预实验确定最佳稀释倍数。
结果计算
双波长检测结果无需进行调0，可直接进行标曲拟合及结果计算。
以下曲线拟合方式均可使用，选择拟合后r值最佳的拟合方式进行结果计算。
l 四参数逻辑（4-P）曲线拟合：以浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐标；
l 多项式曲线拟合：2次多项式、3次多项式；
l 双对数直线拟合：以浓度值取对数，吸光度值取对数后，进行直线拟合；
l 点对点拟合：各相邻点之间分别单独进行线性拟合，分段计算；
推荐使用专业化软件进行结果拟合和计算，如ELISACALC、SPSS、Graphpad Prism等。
**最终样本浓度应乘上样本的稀释倍数。
曲线拟合方式示例图，以下数据和曲线仅供示例，与本试剂盒测定结果无关。
检测的局限性
样本浓度超出检测范围上限时，应当进行适当加大稀释倍数后再次检测，计算结果应当乘上稀释倍数。样本浓度低于LOQ定量限时，检测结果无法进行准确定量。
产品性能指标
以下结果基于校准品的浓度值实验得出，未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。
精密度：板内精密度CV＜10%（N=20），板间精密度CV＜15%（N=20）。
特异性（Analytical specificity）：其他相关因子在稀释缓冲液中测定，没有观察到明显的交叉反应。