pEnCMV-FLAG-STAU1(1-270)质粒载体

pEnCMV-FLAG-STAU1(1-270)质粒载体说明书

如需该质粒图谱可以联系客服索取,更多质粒请联系我们

亲爱的科研工作者,感谢您信任雅吉生物,我们致力于为大家分享质优价适的质粒,受各种因素影响,我们只保证质粒的关键序列测序正确,不能保证实验效果。请您收到质粒后请务必先转化,再挑取单菌落扩增,不要直接使用。如果您需要即用的大包装质粒或病毒颗粒,可委托我们制备,性价比更高。

一、扩增流程

收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。

1、质粒干粉

产品规格:0.5~2μg质粒干粉,保证能转化出来,不保证具体含量,请务必先转化进感受态,再挑单菌落提取后再使用。

保质期限:90天,请尽快转化。

保存温度:一般在-20°C,置于-80°C保存时间更长。

运输方式:常温运输,1周内。

注意事项:转化前请准确查找该质粒相应的抗性、抗性浓度、感受态名称和培养温度。

使用说明:

1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;

2、从-80°C冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;

3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;

4、42℃热激90s,再冰浴2min;

5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;

6、6000rpm离心5min,仅留100μl上清混匀菌体沉淀;

7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;

8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;

9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。

注意:如果平板长的过多,请将质粒稀释后再转化;如果没有长菌落,请取10μl质粒转化。

pEnCMV-FLAG-STAU1(1-270)质粒载体

2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)

产品规格:甘油菌种。

保质期限:90天,请尽快划线培养。

保存温度:-80℃。

运输方式:冰袋运输,1周内。

注意事项:培养前请准确查找该菌种的抗性、抗性浓度和培养温度。

使用说明:

质粒干粉(常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必先转化提质粒后使用)
① 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，
不要搅动，再冰浴2min；（从 步开始均要在超净工作台中无菌操作);
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另外不要直接转表达感受态，
要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，
根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pEnCMV-FLAG-STAU1(1-270)质粒载体常用抗生素推荐浓度:

附表一:

简称	中文名称	溶剂	储存浓度	大肠工作浓度	备注
Amp	氨苄青霉素	ddH2O	100mg/ml	100μg/ml	0.22 μm过滤除菌
Car	羧苄青霉素	ddH2O	50mg/ml	50μg/ml	0.22 μm过滤除菌
Kan	卡那霉素	ddH2O	50mg/ml	50μg/ml	0.22 μm过滤除菌
Spe	壮观霉素	ddH2O	50mg/ml	50μg/ml	0.22 μm过滤除菌
Gen	庆大霉素	ddH2O	50mg/ml	50μg/ml	0.22 μm过滤除菌
Apr	安普霉素	ddH2O	50mg/ml	50μg/ml	0.22 μm过滤除菌
Zeo	博来霉素	ddH2O	100mg/ml	100μg/ml	0.22 μm过滤除菌,低盐高PH的培养基
Blast	杀稻瘟菌素	ddH2O	10mg/ml	50μg/ml	0.22 μm过滤除菌,低盐高PH的培养基
Hyg	潮霉素	ddH2O	50mg/ml	50μg/ml	0.22 μm过滤除菌
Chl	氯霉素	无水乙醇	50mg/ml	50μg/ml	松弛型质粒可以提高到170μg/ml
Str	链霉素	ddH2O	50mg/ml	50μg/ml	0.22 μm过滤除菌
Tet