大鼠(APRT)Elisa试剂盒

大鼠(APRT)Elisa试剂盒检测原理
试剂盒采用双抗原一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被病毒抗原微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中病毒抗体（HIV-Ab）的存在与否。

样品收集、处理及保存方法
1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
大鼠(APRT)Elisa试剂盒操作注意事项
1.  试剂盒保存在2-8℃，使用室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶全溶解后再使用。
2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.  预处理后的样本无需稀释，直接取50μL加样即可。
4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.  所有液体组分使用充分摇匀。

名称          96孔配置       48孔配置       备注
微孔酶标板   12孔×8条      12孔×4条     无
阴性对照          0.5mL        0.5mL          无
阳性对照          0.5mL        0.5mL          无
检测抗原-HRP    10mL         5mL           无
20×洗涤缓冲液   25mL       15mL    按说明书进行稀释
样本稀释液        6mL          3mL            无
底物A                6mL           3mL           无
底物B                6mL           3mL           无
终止液               6mL           3mL           无
封板膜                2张            2张           无
说明书 1份 1份 无

自封袋 1个 1个 无

大鼠(APRT)Elisa试剂盒试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1.   手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.   自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；
3.  待测样本孔加待测样本50μL；
4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

大鼠(APRT)Elisa试剂盒结果判断
1.  试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15。
2.  临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3.  阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性
4.  阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性

试剂盒性能
1. 准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
5. 有效期：6个月

pSV40-STAT1(human)-5UTR-Fluc
pDC316-MBH-mNeonGreen-CMV-PSENEN(human)-FLAG
pLV3-CMV-CPSF3(human)-3×FLAG-Puro
pCMV-CCR7(human)-3×HA-Neo
pCMV-Prkci(mouse)-HA-Neo
pCMV-EIF2AK2(human)-3×FLAG-Neo
pCMV-USP7(human)-3×FLAG-Neo
pLV3-CMV-Itgb7(mouse)-CopGFP-Puro
pCMV-COL1A1(human)-3×FLAG-Neo
pCMV-EDA2R(human)-2-3×FLAG-Neo
pCMV-Pkm(mouse-opt)-Neo
pCMV-Snap23(mouse)-3×FLAG-Neo
pLV3-U6-NLRC5(human)-shRNA3-CopGFP-Puro
pLV3-U6-NLRC5(human)-shRNA1-CopGFP-Puro
pLV3-U6-CXCR3(human)-shRNA1-CopGFP-Puro
pLV3-U6-USP20(human)-shRNA1-CopGFP-Puro
pCMV-FRAS1(human)-3×FLAG-Neo
pLV3-U6-STC1(human)-shRNA2-EGFP-Puro
pLV3-U6-NR2F1(human)-shRNA2-EGFP-Puro
pLV3-U6-RAD51(human)-shRNA2-Puro
pLV3-U6-STC1(human)-shRNA3-EGFP-Puro
pLV3-U6-CD63(human)-sgRNA2-Cas9-EGFP-Puro
pLV3-U6-USP20(human)-shRNA3-CopGFP-Puro
pLV3-U6-PRKN(human)-shRNA1-EGFP-Puro
pLV3-U6-USP20(human)-shRNA2-CopGFP-Puro