RAPA3G SYBR Green qPCR Mix

描 述 ： 本制品是采用 SYBR Green 嵌 合 荧 光 法 进 行
Real-Time PCR 的专用试剂，本 SYBR Green qPCR Mix
将化学修饰的热启动 RAPA3G DNA 聚合酶、反应 Buffer、
dNTP、SYBR Green 染料等试剂预混在一起，是一种 2×浓
度的单组分预混试剂。该制品配有单独的 ROX 内参染料，
可用于需要 ROX 进行孔间校正的定量 PCR 仪。
RAPA3G DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶，其具有最
高的杂质耐受性（对乙醇、胍盐、肝素具有极高的耐受性），
因此对于纯度较差的 DNA 模板，该 Mix 仍然可以获得理想
的实验结果。RAPA3G DNA 聚合酶为化学法修饰的 HotStart
版本，其在 50℃以下 无活性，只有 95℃条件下加热
5min 后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制
非特异性 PCR 扩增，极大的提高了 PCR 扩增特异性。该试
剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围中得到良好的扩增结
果、检测灵敏度更高、信号更强。
包装 规 格
2×RAPA3G SYBR
Green qPCR Mix
50×ROX Dye
1ml （A2250A） 1 ml 200 μl
5ml （A2250B） 1 ml×5 200 μl
储存：
请避光置于-20℃以下可保存３年。该试剂经 30 次冻融后性
能无下降，因此不使用时请置于-20℃避光保存。

操作方法
1. 根据机型选择步骤 A 或 B
A: 需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time
PCR 仪，包括：ABI PRISM7900HT, 7300/7500/7500 Fast
Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P
(Stratagene)等。按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系：
 终浓度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
50×ROX Reference Dye 0.4 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
注意：引物用量有时可提高到 0.8 μl 以提高扩增效率。
B:无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time
PCR 仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)； CFX96
Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博
日)等。按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系：
 终浓度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法，程序如下：
 Stage 1: 95℃ 5min*
 Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 20s 40 cycles
 Stage 3: Dissociation analysis