RAPA3G Probe qPCR Mix

描述：RAPA3G Probe qPCR Mix 将热启动 RAPA3G DNA
聚合酶、反应 Buffer、dNTP 染料等试剂预混在一起，是一
种 2×浓度的单组分预混试剂。该制品不含有 ROX 校正染料，
适用于各种荧光标记探针，并且适用于各种定量 PCR 机型。
优化的反应缓冲液，使得该制品可用于 1~2 重的探针法定量
PCR。
制品中的 RAPA3G DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶，
其具有 的杂质耐受性，其对乙醇、胍盐、肝素、血清、
植物多糖多酚具有极高的耐受性，因此可用于粗样品的直接
定量 PCR 检测(Direct PCR)。该酶经化学法修饰，在 50℃
以下 无活性，只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全
恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性 PCR 扩
增，极大的提高了 PCR 扩增特异性。
包装
2×RAPA3G Probe qPCR Mix
A2259A 1 ml
A2259B 1 ml x 5
储存：
请避光置于-20℃以下可保存３年。该试剂经 30 次冻融后性
能无下降，因此不使用时请置于-20℃避光保存。
RAPA3G DNA 聚合酶对抑制物耐受性
SDS 0.01% Serum 2%
EtOH 5% Plasma Citrate 2%
Heparin 0.1IU/ml Gua SCN 0.25%
Hematin 30μM Trizo

操作方法
1、按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系：
 终浓度
2×RAPA3G Probe qPCR Mix 10 μl 1×
Primer F1 (20 μM) 0.1-0.4 μl 0.1-0.4 μM
Primer R1 (20 μM) 0.1-0.4 μl 0.1-0.4 μM
Probe1 (20 μM) 0.1-0.4 μl 0.1-0.4 μM
其它引物和探针 X
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法，程序如下：
Stage 1 95℃ 5 min 热启动
Stage 2
循环 40 次
95℃ 5 s 变性
60℃ 30 s 收集信号 退火/延伸
注意：退火延伸温度可在 55-65℃调整
3. 在多数情况下，采用两步法程序可获得理想的扩增效果，
在无法达到预期理想效果的情况下，也可采用三步法 PCR
程序，程序如下：
Stage 1 95℃ 5 min 热启动
Stage 2
循环 40 次
95℃ 5 s 变性
55℃ 10 s 退火
72℃ 30 s 收集信号 延伸
4. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线和标准曲
线。