产地 | 上海 |
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品牌 | 雅吉生物 |
货号 | A0604 |
用途 | 科研实验 |
包装规格 | 1ml/10ml |
是否进口 | 否 |
产品描述:该 PCR Mix
具有 5’-3’的聚合酶活性、强 3’-5’的外切酶活性,产物为平末
端。
包装:
A0604A 1ml
A0604B 1 ml×10
特点和用途
(1) 超保真扩增:~280 倍 Taq 的保真性能,是载体构建、点
突变、NGS 模板扩增、基因合成的 用酶。
(2) 快速扩增:具有 6kb/min 的扩增能力。
(3) 长片段扩增:质粒、λDNA 等简单模板可以有效扩
增>20 kb,基因组可以有效扩增>8 kb,cDNA 可以有效扩
增>8kb。
储存:长期储存置于-20°C 以下,可保存 2 年;短期使用置
于 4°C(3 个月)保存。
使用方法
1. 按下表配制反应体系并混合均匀:
2×RAPA HiFi PCR Mix 12.5 μl
上游引物(10 μM) 1 μl
下游引物(10 μM) 1 μl
模板 DNA 1-250 ng
ddH2O up to 25 μl
*模板 DNA 用量参数(25 μl 反应体系)
5-250 ng Genomic DNA
0.1-10 ng Plasmid DNA
1-2 μl cDNA from RT reaction
2. PCR 扩增循环参数
(1)扩增片段<5kb 时采用如下程序
循环数 温度 时间
1
st Cycle 95°C 1min
25-35 Cycles
95°C 30s
50~60°C 30s
72°C 6kb/min
Last Cycle 72°C 2min
(2)扩增片段>5kb 时采用如下程序
循环数 温度 时间
1
st Cycle 92°C 1min
25-35 Cycles
92°C 10s
50~60°C 30s
72°C 2-3kb/min
Last Cycle 72°C 2min
3. 电泳:1% 琼脂糖凝胶电泳,上样 5 μl,电泳结束在紫外
灯下检测条带。
4. 注意事项:(1)当模板 GC 含量>65%时,请添加
5× Q-Solution(Cat. No.: A3002)。(2)当扩增片段<1kb 时,
延伸时间可直接使用 15s,当扩增片段>5kb 时,按照
2-3kb/min 的延伸时间进行设置,能获得更高的产量。(3)
由于不同的 PCR 管其导热性能有所不同,通常 PCR 采用
25μl 体系可以获得更高的产量。