| 产地 | 上海 |
|---|---|
| 品牌 | 雅吉生物 |
| 货号 | A0631 |
| 用途 | 科研实验 |
| 包装规格 | 1ml(20 μl x 100T)/10ml(20 μl x 1000T) |
| 是否进口 | 否 |
本产品仅供科研，如需产品详细説明请联系客服
描述：该制品专为抗凝全血样品直接进行 PCR 设计，其
Blood DNA Pol 聚合酶对全血样本中的杂质具有高度耐受性
（ 加入全血样品为 10%）。在进行血液直扩时，可轻松
扩增出 4.5kb 的 gDNA 片段。该酶的延伸速度为 4kb/min，
产物部分带有”A“尾巴，因此产物可用于 TA 克隆。该制品中
已经含有溴酚蓝染料，PCR 扩增完毕后可直接点样于琼脂糖
凝胶，无需再加入 DNA Loading Buffer。
组分
名 称 100T 1000T
2xBlood Buffer-Mix 1 ml 1 mlx10
Blood DNA Pol (0.4U/μl) 100 μl 1 ml
（1）储存：-20℃ 可保存 2 年。
（2）2xBlood Buffer-Mix 包含：反应缓冲盐、独特抗血因子、
dNTP、Mg
2+、溴酚蓝。
适用样本：哺乳动物抗凝全血、血清、血浆
性能：以人 EDTA 抗凝全血为样本扩增 4.5kb 的片段。
使用方法
1. 按以下组分配制 PCR 反应液
2xBlood Buffer-Mix 10 μl
Blood DNA Pol (0.4U/μl) 1 μl
上游引物（10 μM） 0.25 μl
下游引物（10 μM） 0.25 μl
人抗凝全血 0.5 μl
ddH2O 8 μl
Total（总计） 20 μl
关于样本的用量：由于引物的扩增效率、产物大小不同，样
品的加入量可能会存在差异，推荐的用量为 0.5 μl，有时需
要调整样品的加入量， 可加入 2 μl，进行测试。过高的
样本加入量，可能会由于样本中抗凝剂的浓度过高，螯合
PCR 反应体系中的 Mg
2+，而导致扩增失败。
2. 推荐的“ PCR 扩增参数”
<1kb 1-2kb >2kb
预变性 95°C 2min 2min 2min
循环 1
5 Cycle
95°C 10s 10s 10s
65°C 30s 45s 30s/kb
循环 2
23 Cycle
95°C 10s 10s 10s
55°C 10s 10s 10s
72°C 30s 45s 30s/kb
末延伸 72°C 2min 2min 2min
特殊说明：（1）该“ PCR 扩增参数”在实际应用中，引物
TM 值（50-70℃）范围内均获得良好的扩增。该程序扩增总
循环数为 28（5+23），如产物扩增亮度不足，则增加循环 2
的次数到 25-28 个，通常不宜超过 28。（2）如果仍然不能
获得良好的扩增结果，则可以改变，循环 2 中的退火温度为
50-65°C（上表中为 55°C）。
使用注意事项（必读）
(1) 由于抗凝全血含有大量的蛋白，在 PCR 反应结束后，会
有大量絮状变性蛋白质，此时用 mini 离心机短离心 10-30s
后，再进行电泳，否则会影响电泳的迁移率。
(2) 扩增片段 GC 含量>60%时，推荐添加 5xQ Solution（货
号：A3002）至 1x 浓度，来提升高 GC 含量的扩增性能。
