Bsu DNA聚合酶 大片段

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Bsu DNA聚合酶是具有链置换活性的DNA恒温扩增聚合酶，主要应用于RPA重组酶扩增。重组酶UvsX与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列；一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应，Bsu DNA聚合酶启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。
本Bsu DNA 聚合酶来源于 嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus subtilis），系将Bacillus subtilis DNA 聚合酶（Bsu） I 基因的前296个AA截去而得。该酶保留了Bsu I 的 5′-3′ 聚合酶活性，但是缺失了 5′-3′ 核酸外切酶结构域，该酶自身缺失 3′-5′ 核酸外切酶活性，可用于重组酶扩增。
应用
随机引物法标记
cDNA 条链的合成
单个 dA 的加尾
链置换的 DNA 合成
活性定义
在37℃条件下，30min内参入10nmol酸性不容物定义为1个活性单位。
性能测试
按照如下体系配制反应：
Plasmid DNA                                    100 ng
10×Bsu Reaction Buffer                        5 μl
Random9 (100μM)                               2 μl
dNTP mixture(10 mM)                          2 μl
Rnase free H2O                           upto 50 μl

储存
-20℃可保存2年，避免反复冻融。
热失活
75°C，20min。
注意事项
1、由于缺乏3 ′-5 ′核酸外切酶活性，Bsu DNA 聚合酶不能切除 3′未配对的突出末端，因而不适用于生成平齐末端。
2、25℃ 时 Bsu DNA 聚合酶 保留 50% 的活性，是同温度下 Klenow 片段（3′-5′ exo-）的两倍。