人骨骼肌成肌细胞永生化

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产品名称：人骨骼肌成肌细胞永生化

产品规格：1×10^6cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 

人骨骼肌成肌细胞永生化的培养

原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把 代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。 

最常用的原代细胞的培养有组织块培养和分散细胞培养。

组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上，加入培养基后进行培养。

人骨骼肌成肌细胞永生化培养大致步骤为：

将动物组织从机体中取出离散成单个细胞(常用胰蛋白酶)，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖(注意整个过程无菌)。CK-18、CK-19、vWF、Factor VIII等免疫荧光鉴定呈阳性，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

生长特性，生长条件，培养条件，培养温度，空气条件，传代方法，冻存条件等详情请联系我们，免费索取该产品说明书。

使用方法 ：在我公司技术部标准操作流程下，建议您收到细胞后尽快进行相关实验。 客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。以便后续传代使用或者其他实验使用。

我公司经营销售美国ATCC原代细胞或细胞系，美国sciencell原代细胞或细胞系，3000余种细胞系品种齐全。

我公司提供自建细胞库原代细胞或细胞系，各类原代细胞有采用酶解法制备而来，密度梯度离心法制备，体外多步灌注法制备等等，欢迎新老客户咨询订购。

人骨骼肌成肌细胞永生化细胞收货脱落 

1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；  

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；  

3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；  

4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。  

细胞培养步骤

a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养。

贴壁细胞传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶， 放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤日下：

1、半换液法

半换液处理，竖着培养瓶在培养箱静置1小时左右，轻轻吸掉3ml左右培养基，然后补给3ml的完全培养基，如果培养基变色慢，可直接加500ul左右FBS，传代的时候可以直接补给5ml培养基  分两个培养瓶培养，一般这样传代3次左右可以离心传代一次，去掉死细胞。

2、离心换液法

如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

b、细胞冻存：

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 

3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 

4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。

C、细胞复苏：

1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 

3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；

4、 天，换用新鲜完全培养基继续培养。

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