鼠腹水瘤细胞

用无菌离心管收集瓶子培养基,留作过渡培养

鼠腹水瘤细胞收到后处理

培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的 办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶,消毒后放到超净台内严格无菌操作,将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存( 40x,100x,200x各一张),前三天照片是重要售后依据,不提供照片默认收到状态良好。(传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基,另外一瓶用自己配的完全培养基,以便进行对比培养,换液拧松瓶盖),该细胞的STR鉴定可向客服咨询索取。

鼠腹水瘤细胞培养步骤

a、细胞传代:如果未超过80%汇合度时,将瓶装的完全培养液收集至离心管中,留5ml完全培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;如果细胞密度超80%,即可进行传代培养,

1)对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞,使之完全脱落后吸出,然后将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL完全培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含8ml完全培养基的新瓶中。

方法二:可选择半换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml完全培养基新瓶中。

b、细胞冻存:

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心 5min;

3、 弃上清,沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),混匀后加入冻存管中。

4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要将细胞转入液氮罐中,则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。

C、细胞复苏:

1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3、弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养; 天,换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项:有些细胞贴壁不牢,在运输过程中发生容易细胞脱落,这是正常现象。可将培养瓶所有培养液收集至离心管,1000rpm离心5min,收集上清作过渡培养(后期对比培养),沉淀加入胰酶1-2ml,轻轻吹打,重悬,消化1-2分钟后,加5ml完全培养基终止反应。再离心,弃上清,加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶, 放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。

E-10007人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR）Elisa测定试剂盒

E-10008人免疫球蛋白AFc段受体Ⅰ(FcαRⅠ/CD89）Elisa测定试剂盒

E-10009人免疫球蛋白EFc段受体Ⅱ(FcεRⅡ/CD23）Elisa测定试剂盒

E-10010人免疫球蛋白GFc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16）Elisa测定试剂盒

E-10011人免疫球蛋白GFc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32）Elisa测定试剂盒

E-10012人免疫球蛋白GFc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64）Elisa测定试剂盒GFc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64）Elisa测定试剂盒

E-10013人免疫球蛋白GFc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16）Elisa测定试剂盒

E-10014人免疫球蛋白GFc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32）Elisa测定试剂盒

E-10015人免疫球蛋白GFc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64）Elisa测定试剂盒

E-10016人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6）Elisa测定试剂盒

E-10017人ω干扰素(IFN-ω）Elisa测定试剂盒

E-10018人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1）Elisa测定试剂盒

E-10019人干扰素调节因子(IRF）Elisa测定试剂盒

E-10020人淋巴毒素β(LTB）Elisa测定试剂盒

E-10021人淋巴毒素α(LTA）Elisa测定试剂盒

E-10022人CC趋化因子受体1(CCR1）Elisa测定试剂盒

E-10023人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1）Elisa测定试剂盒